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THz-PCR技術在法醫檢測中展現應用前景

更新時間:2023-02-27      點擊次數:2105

 

PCR(聚合酶鏈式反應)是一種用于放大擴增特定的DNA片段的分子生物學技術,應用十分廣泛,而THz(Tera Hertz,太赫茲)是波動頻率單位之一,指頻率在0.1~10 THz(波長為3000~30μm)范圍內的電磁波。二者結合起來的THz-PCR是一種創新型的新技術,近期國科大溫州研究院PI張峰老師課題組在美國工程技術-材料科學類期刊ACS Applied Materials & Interfaces雜志上發表了題為“THz-PCR Based on Resonant Coupling between Middle Infrared and DNA Carbonyl Vibrations”的文章,研究探討了基于中紅外線與DNA羰基振動共振耦合的THz-PCR。

 

背景介紹:

生物大分子的旋轉和振動能級落在太赫茲(THz)波的能量范圍內,而太赫茲波又可以通過共振耦合方式與生物分子相互作用。在過去的幾十年里,THz技術已經發展起來,通過光譜成像來區分正常組織和癌癥組織,例如,通過監測DNA甲基化的分子共振指紋圖譜來早期診斷癌癥細胞。在過去幾年中,太赫茲(THz)的應用對生物醫學、人工智能甚至發展等重要領域都產生了重大影響。由于THz能量遠低于化學鍵活力,功率低于mW/cm2THz電磁波在數十分鐘的照射過程中不會對角膜組織、焦點細胞、視網膜神經節細胞、皮膚成纖維細胞和脫氧核糖核酸(DNA)造成破壞性傷害,這保證了THz照射的安全應用。作者研究團隊的合作者使用53.53THz激光通過與離子通道中羰基的相干共振耦合來操縱鉀通道,實現了神經信號的可逆無創調節。還有其他論文報道,35.2 THz的輻射可以與DNA堿基的振動共振,并引發氫鍵斷裂,這反過來糾正了DNA雜交的錯配率,提高了折紙結構的產率。為了了解太赫茲輻射對其他生命活動的量子效應,特別是那些最重要的生化反應,例如DNA復制,作者研究團隊選擇了53THz激光,以實現中紅外線和DNA羰基之間的振動強耦合(VSC),并探究了它對體外DNA復制(如PCR反應)的影響。

圖片2.png

 

實驗方法:

準備好實驗用的DNA和其它相關檢測試劑、試劑盒等,然后進行PCR擴增反應,PCR實驗在柏恒科技PCR儀上進行(Q3200,Bio-Gener)。PCR程序包括以下兩個階段:第一階段之前是95°C下30秒的預變性過程,然后是八個循環,每個循環包括95°C的變性過程5秒和62°C的退火過程20秒。此外,第二階段為30個循環,每個循環包括特殊梯度溫度和梯度時間的變性過程以及37°C下的退火和延伸過程20秒。整個階段使用PCR儀(Q3200,Bio-Gener,圖S1)進行THz輻照。

圖片3.png

 

S1.THz-PCR體系實際照片。將含有PCR試劑溶液(20μL)的200μL PCR管安裝到PCR儀中,無需關閉加熱蓋,并53.53 THz激光照射。

 

法醫檢測應用:目標蛋白編碼基因為SOX 21,檢測采用THz PCR和常規PCR。首先將血染紙切成小塊,浸泡處理后將上清液直接用作PCR檢測的模板。整個階段使用PCR儀(Q3200,Bio-Gener,圖S1)進行THz照射,另一個樣品以相同的方案進行,沒有THz照射作為對照。實驗結束后進行結果分析。

 

作者研究團隊中用到的PCR儀來自柏恒科技,Q3200熒光定量PCR儀是柏恒科技創新研發的一款儀器產品,雙槽設計,一機兩用,產品功能*。

圖片4.png

 

實驗結果:

使用聚合酶鏈反應(PCR)作為測量手段,研究團隊發現THz照射可以將DNA雙鏈體的變性溫度降低約3°C,這允許在較低溫度下進行PCR,促進長時間擴增反應而不損失酶保真度與正常加熱相比,THz照射可以顯著減少DNA雜交,雙鏈DNA(dsDNA)解鏈變得更容易和更快。同時,PCR的效率和目的DNA的產率都得到了提高。

基于上述研究,研究團隊發現THz PCR作為一種創新的DNA擴增技術,具有超高的特異性和敏感性,并成功地證明了其在法醫檢測中的優勢。柏恒科技Q3200 熒光PCR儀在研究中發揮重要作用。

 

 

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